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          了解一下?!Mirus Label IT?核酸标记系列

          说起Mirus,可不只有转染试剂哦,他的另一大产品线 Label IT® 系列是专门用于DNA和RNA标记的试剂盒。Label IT®采用的是一种非酶化学方法,可以将荧光或非荧光标记物通过一步法化学反应直接标记在DNA或RNA上,且不影响核酸的杂交、表达等下游实验,非常的方便快捷。那么什么是一步标记法呢?它的秘密就在标记物的设计上,如下图。 Mirus Label IT®系列标记物由三部分结构组成,分别是:荧光基团或半抗原(绿色部分),Linker(黄色部分)和反应基团(蓝色部分)。当标记物与待标记核酸混合后,在37℃条件下孵育1小时,Label IT®标记物就能通过供价结合方式,不可逆地标记在DNA或RNA链上,反应流程如下所示。 由于Label IT®标记方法不会破坏核酸序列及其结构完整性,使得该技术可以广泛应用于体内和体外分子生物学实验。根据实验应用及核酸类型的不同,Label IT®试剂盒共有以下三大系列: ü 常规DNA/RNA标记系列-Label IT® Nucleic Acid Labeling Kits ü 固相表面核酸标记系列(芯片标记)-Label IT® Nucleic Acid Modifying Kit ü 胞内定位示踪DNA/siRNA标记系列- Label IT® Tracker? Intracellular Nucleic Acid Localization Kits / Label IT® siRNA Tracker Intracellular Localization Kits 此外,Label IT®的标记物类型非常丰富,不论是荧光(CX-rhodamine,fluorescein, MFP488, Cy®3, Cy®5, TM-rhodamine)还是半抗原标记(biotin, dinitrophenol (DNP) , digoxin),Label IT®全都提供,并且通过调整标记物浓度和孵育时间,还能调节核酸标记密度,操作简单到难以想象! Label IT®系列试剂盒包装延续了Mirus一贯高端大气的红白配色和铁制外盒的标配,不仅产品好用且辨识度极高,在凌乱的-20冰箱里一眼就可以找到它,再也不用把冰箱翻个底朝天,无形中又让实验效率提高了不少呢。 根据标记物种类和实验类型,我们可以根据下表找到适合的Label IT®核酸标记试剂盒,联系Mirus品牌中国地区授权代理商北京西美杰科技有限公司即可订购。 Label IT®常规DNA/RNA标记系列 标记物 货号 规格 CX-Rhodamine MIR 3100 100 μg MIR 3125 25 μg MFP488 MIR 7100 100 μg MIR 7125 25 μg Fluorescein MIR 3200 100 μg MIR 3225 25 μg Digoxin MIR 3300 100 μg MIR 3325 25 μg Biotin MIR 3400 100 μg MIR 3425 25 μg Cy®3 MIR 3600 100 μg MIR 3625 25 μg Cy®5 MIR 3700 100 μg MIR 3725 25 μg DNP MIR 3800 100 μg MIR 3825 25 μg TM-Rhodamine MIR 4100 100 μg MIR 4125 25 μg Label IT®固相表面核酸标记系列 标记物 货号 规格 Amine MIR 3900 100 μg MIR 3925 25 μg Label IT® TrackerTM胞内定位示踪标记系列 标记物 核酸类型 货号 规格 CX-Rhodamine DNA MIR 7022 50~200 μg siRNA MIR 7214 50 μg Fluorescein DNA MIR 7025 50~200 μg siRNA MIR 7216 50 μg Biotin DNA MIR 7024 50~200 μg siRNA MIR 7217 50 μg Cy®3 DNA MIR 7020 50~200 μg siRNA MIR 7212 50 μg Cy®5 DNA MIR 7021 50~200 μg siRNA MIR 7213 50 μg TM-Rhodamine DNA MIR 7023 50~200 μg siRNA MIR 7215 50 μg 附表:不同荧光标记物的激发光和发射光波长 荧光标记物 激发波长 (nm) 发射波长 (nm) CX-Rhodamine 576 597 MFP 488 501 523 Fluorescein 494 518 Cy®3 550 570 Cy®5 649 670 TM-Rhodamine 546 576 更多>

          植物组培抗菌保护剂——Plant Preservative Mixture(PPM?)

          植物组培广泛应用于植物科研:如模式植物,作物育种等;工厂化生产:如观赏花卉植物,中药材生产,园林园艺等,但是组培过程中种苗的污染,尤其是真菌和内生菌的污染是广大工作者十分头疼的问题。美国Plant CellTechnology(简称PCT)专门为植物组织培养而研发的专利产品——Plant Preservative Mixture(简称PPM?,专利号5750402),可以有效抑制由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的细菌、真菌和农杆菌污染。 产品特点: 1. 无毒性——PPM是一种热稳定的抗菌剂,用于植物组织培养中植物的微生物污染防治与清除。在合理的使用剂量下,不会对植物的生长(如种子萌发,愈伤增殖、再生等)产生任何影响,可视为培养基标准配方成份; 2. 作用效果好——PPM 主要用于预防和消除来自空气、水源或者人体接触等外界因素导致的植物组培过程中的微生物污染,同时,对于植物内生菌也同样具有非常好的抑制效果; 3. 适用物种广泛——PPM广泛适用于绝大多数被子植物和裸子植物; 4. 使用方便——PPM具有热稳定性,能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果,使用更加方便; 5. 性价比高——PPM相对于常规抗生素而言,用量低,性价比更高。 相对抗生素的优势: 1. PPM 能广泛抑制和清除细菌和真菌的污染,并防止真菌孢子的萌发; 2. PPM 是通过抑制多种酶的活性而达到抑菌效果,从而能避免耐药突变体的发生; 3. PPM 具有热稳定性,无需过滤灭菌,能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果,使用更加方便; 4. PPM 性价比更高,可更加广泛的应用于更多的科学研究、作物育种、组培苗工厂化生产中。 使用方法: 以下使用指南是针对大多数情况下的常规使用说明,特殊情况可做适当调整。 *说明:MS 盐溶液是泛指,如样本的培养基盐溶液不是MS 盐,以具体适用的培养基盐溶液为准;产品订购信息: 更多>

          NEW!专利产品Bambanker无血清即用型细胞冻存液

          Bambanker无血清即用型细胞冻存液—给细胞更多的呵护 专利产品(专利号1347040) Serum-free for sensitive cell lines, like ES and primary cells, Gradual or programmable freezing is no longer necessary BAMBANKER产品特点 即用型细胞冻存液,无需程序性降温 尤其适用于各类敏感细胞,如ES细胞、原代细胞 高复苏率(请见对比图效果) 可-80℃或液氮中长期冻存,稳定保存1年以上 无血清,成份确定,避免由支原体、病毒、朊病毒及其他病毒颗粒引发的污染 产品经无菌检测,符合日本药典 产品可2~8 ℃稳定保存2年 BAMBANKER操作流程使用说明: 收集对数生长期的细胞(5 x 105 ~ 1 x 107) 用1ml BambankerTM重悬细胞,置于冻存管中,无需预冷。 品名 货号 规格 BambankerTM BB01 120ml BAMBANKER系列冻存液: 品名 描述 货号 规格 BambankerTM Direct 细胞冻存时无需离心,非常适用于杂交瘤细胞 BBD01 20ml BambankerTM HRM 使用人血清白蛋白,无动物源性 BBH01 20ml BAMBANKER is manufactured by LYMPHOTEC Inc. BAMBANKER与其他相关产品的复苏率效果比较 Bambanker使用发表文献(部分) ü T. Hikichi et al., Differentiation potential of parthenogenetic embryonic stem cells is improved by nuclear transfer. Stem cells25, 46 (Jan, 2007). ü S. Mieno et al., Characteristics and function of cryopreserved bone marrow-derived endothelial progenitor cells. The Annals of thoracic surgery85, 1361 (Apr, 2008). ü S. Hatoya et al., Effect of co-culturing with embryonic fibroblasts on IVM, IVF and IVC of canine oocytes. Theriogenology66, 1083 (Sep 15, 2006). ü D. Liu et al., Relation between human decay-accelerating factor (hDAF) expression in pig cells andinhibition of human serum anti-pig cytotoxicity: value of highly expressed hDAF for xenotransplantation. Xenotransplantation14, 67 (Jan, 2007). ü S. K. Zaidi et al., Runx2 deficiency and defective subnuclear targeting bypass senescence to promote immortalization and tumorigenic potential. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America104, 19861 (Dec 11, 2007). ü S. Mieno et al., Effects of diabetes mellitus on VEGF-induced proliferation response in bone marrow derived endothelial progenitor cells. Journal of cardiac surgery25, 618 (Sep, 2010). ü Y. Shimizu et al., Impaired Tax-specific T-cell responses with insufficient control of HTLV-1 in a subgroup of individuals at asymptomatic and smoldering stages. Cancer science100, 481 (Mar, 2009). 更多>

          Cali-Bio琼脂糖Hg agarose低电内渗高分辨率低熔点

          美国Cali-Bio公司新系列高品质琼脂糖 NO.1 HgAgarose LE低电内渗琼脂糖(绿色优选) 简介:HgAgarose LE高纯度低电内渗(Low EEO)多用途琼脂糖,是“绿色”琼脂糖,采用绿色环保原创工艺,生产全程不使用有机溶剂,减少对环境污染以及对操作者和样品影响。 用途:DNA/RNA凝胶电泳与回收 使用方法:根据分离片段大小称量对应的琼脂糖,加入相应体积的缓冲液,微波炉高火至沸腾,保持沸腾30秒,取出后重悬未溶颗粒,再次用高火加热1-2 分钟,或直至琼脂糖完全溶解。 HgAgarose产品特性 è 绿色环保工艺 è 高分辨率:让您一目了然 è 低背景:给您清新视野 è 高强度凝胶:让您操作轻松自如 è 低电渗:加快条带移动为您节约实验时间 è 稳定品质:使您的实验结果良好重现 NO.2 HgAgarose LE, Tablets 片剂 性能比较 HgAgarose 片剂 其他粉剂 è采用绿色环保工艺的低电渗琼脂糖 è传统的有机溶剂生产工艺 è不用称量 è需要称量 è泡罩板包装,易于分拆,存取和携带 è传统瓶装,不便于分拆,存取和携带 è避免溶解中琼脂糖粉末挂壁现象 è很难避免溶解中琼脂糖粉末挂壁现象 HgAgarose使用方法:加热前,先将HgAgarose片剂在缓冲液中浸泡2-3分钟使之完全崩解,后续操作和粉末琼脂糖相同 NO.3 HgAgarose LM Agarose, Low Melting Point 低熔点琼脂糖 简介:改性工艺制得的低熔点琼脂糖,凝胶结构更细致,具有更高的分辨率,低熔点(65℃以下),应用更加广泛。 用途:DNA/RNA电泳与胶回收;凝胶内进行的酶促反应、组织培养、细胞克隆以及病毒空斑实验; 使用方法:根据分离片段大小称量对应的琼脂糖,加入相应体积的缓冲液,微波炉中火至沸腾,保持沸腾30秒,取出后重悬未溶颗粒,再次用高火加热1 分钟,或直至琼脂糖完全溶解。 HgAgarose产品特性 è 胶液更清澈, 强度较低,依然可以轻松操作 è 可以配制更高浓度的凝胶 è 更高的分辨率 è 很低的背景 è 稳定的品质 NO.4 HgAgarose HR Agarose, PCR Grade 高分辨率琼脂糖 简介:改良工艺制得的高分辨率琼脂糖(High Resolution Agarose)对PCR 产物,小片段DNA 具有很高的分辨率,可以和聚丙烯酰胺相媲美,适宜分离与回收 20 bp - 800 bp DNA片段。 使用方法:根据分离片段大小称量对应的琼脂糖,加入相应体积的缓冲液,微波炉中火至沸腾,保持沸腾30秒,取出后重悬未溶颗粒,再次用高火加热1 分钟,或直至琼脂糖完全溶解。 HgAgarose产品特性 极高的分辨率 胶液更清澈,较高的凝胶强度 可以配制更高浓度的凝胶 很低的背景 稳定的品质 HgAgarose系列琼脂糖产品详细参数: 产品名称 HgAgarose LE HgAgarose LE Tablets HgAgarose LM HgAgarose HR CAS 9012-36-6 9012-36-6 39346-81-1 39346-81-1 外观 白色粉末 白色片剂 白色粉末 白色粉末 EEO < 0.13 < 0.13 < 0.10 < 0.10 凝胶温度 36°C±1.5°C (1.5% gel) 36°C±1.5°C (1.5% gel) 26°C-30°C (1.5% gel) <33°C (1.5% gel) 融胶温度 88°C±1.5°C (1.5% gel) 88°C±1.5°C (1.5% gel) ≤65°C (1.5% gel) ≤70°C (1.5% gel) 凝胶强度 >1200 g/cm2 (1% gel) >1200 g/cm2 (1% gel) >200 g/cm2 (1% gel) >750 g/cm2 (1.5% gel) 溶解性 无色清澈胶液 无色清澈胶液 无色清澈胶液 无色清澈胶液 水分 ≤ 10% ≤ 10% ≤10% ≤10% 灰分 ≤ 0.5% ≤ 0.5% ≤0.5% ≤0.5% 硫化物 ≤ 0.15% ≤ 0.15% ≤0.10% ≤ 0.10% DNA酶和RNA酶 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 蛋白酶 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 核酸内切酶 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 HgAgarose产品订购指南 英文名称 中文名称 货号 HgAgarose LE, Multi-purpose 琼脂糖,低电渗,普通电泳级别 CB300005 HgAgarose LE, Tablets 琼脂糖,低电渗,普通电泳级别,片剂 CB300006 HgAgarose LM Agarose, Low Melting Point 琼脂糖,低熔点 CB300007 HgAgarose HR Agarose, PCR Grade 琼脂糖,高分辨率,PCR级 CB300008 GS DNA Dye, 10,000X in Water 绿色核酸标记染料,安全型EB替代物 CB300009 更多分子生物学产品可咨询 Cali-Bio中国总代理-北京西美杰科技有限公司全国客服电话 400-050-4006 更多>

          西美杰携手Cygnus重磅推出HCP检测特异性(抗原覆盖率)验证服务

          试剂盒适用性(抗原覆盖率)验证服务简介 生物制品中的宿主细胞残留蛋白会导致过敏反应或潜在毒性等不良临床反应风险。因此必须建立合适的HCP检测验证方法来严格控制生物制品的质量。目前生物制品行业多以商业化的通用型HCP ELISA试剂盒来检测产品中的宿主蛋白残留(如Cygnus Technologies)。但宿主细胞的分泌型蛋白和部分死亡细胞释放的结构蛋白成分复杂,不同的工艺,加上相关基因产物需要经过独特的翻译后修饰,这些都大大增加了HCP的品种数量和生化复杂性。因此,通用型商品化HCP ELISA试剂盒中的多克隆抗体对宿主残留蛋白的特异性问题很难进行评估。若商品化ELISA试剂盒中的多克隆抗体特异性和适用性不够高,则会带来漏检HCP的风险,从而对生物制品质量安全带来风险。因此,世界各地的监管部门比如FDA,CFDA对生物制品企业使用的商品化HCP ELISA试剂盒需要提供相关证明,需要证明该ELISA试剂盒中使用的抗体与已知工艺流程中发现的大量HCPs可以广泛反应,即试剂盒适用性或抗原覆盖率验证。在申报临床实验时每个企业都需要提供相关的数据来证明这一点,进而继续进行接下来的研发工作。 目前,做此项验证,被广泛认知的方法是传统2D-WB法,是基于等电点和分子量不同的原理,蛋白在凝胶上通过SDS-PAGE方法被分离。其中一张胶被银染,另一张被转到PVDF膜上,并结合ELISA试剂盒中的抗体进行Western Blotting检测。两张图片通过电子手段进行叠加,然后由计算机分析覆盖率。由于在实验方法上存在一定局限性,有一些无法避免的缺陷。 2D-WB法的局限性 Ø 灵敏度低,只适用于上游样品的分析; Ø 样品需要经过变性处理,一些表位可能会被破坏而不能被抗体识别; Ø 银染的胶与WB膜只能通过人工匹配操作,存在人为误差; Ø 银染与WB的灵敏度本身存在差异,导致可信度不够高; Cygnus Technologies Inc.是美国的一家生物技术公司,该公司专注于为生物制药和生物技术等企业提供高度专业化的用于研发和质量检测过程中的分析产品。作为公认的生物污染物(例如宿主残留蛋白HCP)检测专家,Cygnus向全球客户提供了不同种类经过严格验证和广泛识别的ELISA试剂盒和免疫分析试剂。同时,作为生物污染物分析中的企业,Cygnus还可以向客户提供专业的专属抗体及试剂盒开发和验证等服务。具体服务项目包括试剂盒适用性(抗原覆盖率)验证服务和专属性试剂盒开发服务。 Cygnus除了传统的2D-WB的验证服务以外,还独家推出的更高特异性验证方法,Cygnus还研发更高特异性检测的方法:AAE(Antibody Affinity Extraction)。该方法在样本处理方式上做了非常大的改进,能够弥补2D-WB的缺陷,具有更高的特异性和灵敏度。 AAE新型验证方法优势 ü 独特样本处理方法:更高的灵敏度和特异性 ü 可用于纯化后的样本分析,真正反映试剂盒对工艺过程中或终产物中残留的覆盖率 ü 可直接通过仪器分析避免人工误差,结果可信度更高 ü 已被FDA认可 此外,Cygnus的专利抗体生产和亲和纯化技术能够生产出高灵敏度和广谱反应的多克隆抗体及相关试剂盒产品。还能为广大的生物制品企业提供后续的专属检测产品的开发服务: 专属HCP检测抗体定制服务 Ø 提供全部项目报告 Ø 约5~6L抗血清 Ø 抗体亲和纯化的全部技术 专属HCP试剂盒开发服务 Ø 完整的ELISA试剂盒开发及检测报告 Ø 转让试剂盒生产工艺 Ø 提供试剂盒有效性鉴定的技术指导 北京西美杰科技有限公司(以下简称西美杰)作为Cygnus在中国总代理,在试剂盒开发和验证服务中可为客户提供一站式服务,包括服务技术咨询,样本申报清关寄送,服务进展查询,服务报告整理接收等,大量节省了客户的时间。西美杰已经成功为中国生物制药多个客户提供了满意的HCP特异性验证服务,助客户高效临床报批一臂之力。 西美杰现货供应——Cygnus热销经典试剂盒 如CHO,E.coli,Pichia pastoris,Vero,293等细胞株HCP检测试剂盒 Protein A检测系列 DNA残留等检测试剂盒及相关试剂 如您对工艺过程中的各类生物污染物检测产品或者服务感兴趣,请拨打全国服务热线400-050-4006进行咨询。 更多>

          如何选择合适的通用CHO HCP检测试剂盒

          Cygnus众多产品中,CHO HCP残留检测试剂盒自上市以来,不仅得到广大使用者的认可,更得到了各地药品监管部门,如美国FDA,中国CFDA的认可,为企业产品申报节省了大量时间与金钱。目前,Cygnus CHO HCP检测试剂盒已经发展到第三代产品(F550)。这三款试剂盒之间到底有什么样的区别?初次进行HCP研究的人员该怎么样选择合适的试剂盒?下面将对不同试剂盒进行比较分析,并给出选择建议。三款试剂盒有什么区别和联系?F015第一代CHO HCP检测试剂盒。F015是Cygnus在20多年前开发的第一款CHO HCP检测试剂盒, CHO细胞经过温和裂解后,将此裂解液作为免疫原。同时,抗体的亲和纯化和试剂盒标准品的制备所用材料都来源于此裂解液。这个裂解的过程产生了一系列HCP,这些HCP与收获产品时细胞培养基中的HCP极为相似。CM015第二代CHO HCP检测试剂盒。继F015试剂盒上市2年后,Cygnus推出了CHO HCP检测第二代产品CM015。由于大部分由CHO细胞表达的产品会分泌到培养基中,CM015试剂盒采用conditioned media作为原材料进行抗体的开发,所以以这种培养基为免疫原研发出的抗体或试剂盒要比细胞裂解液特异性更强。F550第三代CHO HCP检测试剂盒。直至今日,Cygnus的第三代F550 CHO HCP检测试剂盒已经得到了来自全球使用者的认可。与CM015类似,F550同样采用conditioned media进行抗体的生产。然而,较前两代试剂盒,这次Cygnus研发团队凭借多年的抗体研发和亲和纯化经验,生产出的抗体具有更广泛的反应性。同时,抗体还用不同方法,如Antibody Affinity Extract(AAE),对抗体的覆盖率进行了分析。所以,对于绝大部分样品,F550是目前可更广泛与不同样品反应,并能提供更准确检测结果的试剂盒。CHO HCP检测试剂盒选择与验证对于特定的产品或者样品类型,在没有前期验证的情况下,没有人能够预测哪个试剂盒更适合。因为F550抗体的生产和试剂盒的研发采用的是最新的技术,并且抗体对于大部分样品中HCP能够更广泛的反应,所以建议新的使用者首先测试这个试剂盒。在选择了一款试剂盒后,需要做一系列的验证实验来验证试剂盒适用于我们的样品及工艺。通常的验证实验包括抗体覆盖率的验证、稀释线性、准确度、精确度、定量限等验证。Cygnus专利技术Antibody Affinity Extract(AAE)方法覆盖率的验证从灵敏度、特异性等方法较传统的2DWB提高了很多,检测的结果能更真实反应覆盖率。其他HCP ELISA试剂盒方法学验证模板以及AAE覆盖率分析方法介绍和比较等文件,请详细北京西美杰科技有限公司获取。Cygnus是美国一家专注于为制药和生物技术企业工艺研发和质量管理中提供专业分析产品及解决方案的公司。产品线覆盖广泛,包括针对多种不同宿主的HCP检测试剂盒,适用不同填料的Protein A检测试剂盒,满足不同实验需求的宿主DNA残留检测试剂盒,其他生物过程中污染物残留检测试剂盒,以及针对特殊样品和工艺的专属抗体和试剂盒定制服务等。北京西美杰科技有限公司作为Cygnus在中国总代理,与国内众多知名药企,CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来西美杰的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段,提高药物质量、纯度和安全,加速优化研发工艺,减少产品上市时间,降低QC成本。如您的产品涉及特殊样品或表达系统,西美杰还可以为您定制专属于您的产品的解决方案和验证服务。欢迎致电西美杰400-050-4006或者登陆网站了解更多信息。 更多>

          疫苗生产降血清培养方案推荐|西美杰科技

          随着国家药品监督管理部门对药品生产监管力度越来越大,生物制药和疫苗生产企业对产品安全性管理要求越来越高,在疫苗生产过程中采用无动物源成份的原辅料是日益增长的要求趋势,但目前,绝大部分疫苗生产还离不开细胞培养过程中血清成份的添加,但使用血清,必须面对血清带来的系列问题和缺点: 1.     批间差较大:每批血清可能适合某些细胞系,换血清批号要做广泛实验,大量储存提高成本,且很难实现大规模生产过程的标准化,也在一定程度上影响疫苗的批次稳定性; 2.     污染风险:血清常受病毒污染,虽对多数细胞培养无害,但增加了不能控制的因素,一旦出问题,需要耗费相当大的时间、物资和人力成本去解决; 3.     不确定性:血清中含有广泛的未知微量成分,对其存在的作用还远未搞清楚,也增加了纯化和疫苗质量控制的难度; 4.     高成本:高质量血清供应不足,全球血清趋紧,且价格仍不断上升,成本往往是细胞培养基成本的数倍,给疫苗生产企业带来相当大的成本压力; 因此,如何降低血清在疫苗生产中的用量,从而减少使用血清带来的风险和高成本,是疫苗生产企业广泛关注且努力寻找解决方案的重要问题。 与传统的高血清含量细胞培养相比,采用低血清细胞培养方式,不仅能够降低疫苗安全性风险,还能提高企业生产效率,使用低血清培养基进行疫苗生产,细胞经驯化适应后,与传统培养方式相比,细胞数量提高,细胞长满单层时间大大缩短,分种比例、病毒滴度也有所提高,同时减少劳动强度,从而大大提高企业的生产效率,重要的是,降低了疫苗生产企业的综合成本。 北京西美杰科技有限公司(以下简称西美杰)为疫苗客户引进培养基营养添加物供应商——KERRY,其高品质的植物源蛋白水解物、复合非动物源性添加物系统、超滤酵母粉、重组低内毒素白蛋白服务于全球疫苗生产企业、培养基生产企业近70年,为广大疫苗客户很大程度上解决了血清带来的困扰。目前在国内,KERRY系列产品已经广泛应用于疫苗生产的BHK、VERO、SF-9、MDCK、MRC5等细胞株中,上市疫苗品种有:口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等,血清使用量已经从从10%降低到3%,少数客户已经实现了完全无血清培养。 使用KERRY Sheff-VAX系统用于VERO细胞降血清驯化案例 图1. Vero细胞生长形态对比。(A)对照组:10%胎牛血清;(B):实验组:0%胎牛血清+2g/L Sheff-VAX ACF。根据观察,A对照组中的Vero细胞和B实验组的细胞没有不同。所有图片都是用100X莱卡显微镜拍摄。图2. 以Vero细胞在含有10%的胎牛血清的培养基中生长曲线为对照组,对比细胞在逐渐减少血清的情况下加入Sheff-Vax添加物进行细胞穿戴。DMEM作为基础培养基。 (i)10%胎牛血清; (ii)7.5%胎牛血清; (iii)5%胎牛血清; (iv)2.5%胎牛血清; (v)1.5%胎牛血清; (vi)1%胎牛血清; (vii)0.5%胎牛血清; (viii)0.25%胎牛血清; (ix)0.1%胎牛血清; (x)0 %胎牛血清。 用逐渐减少血清的方法,可以实现Vero细胞的无血清培养。在同样的培养基时间内,有添加物培养基中的细胞可达对照组细胞密度峰值的一半。但通过延长培养时间,可获得更高的细胞密度峰值。 推荐疫苗生产细胞培养添加物系列产品介绍: 1. 非动物复合添加物Sheff-VAX系列 PF为无蛋白,plus为含微量元素 2. 非动物源Hypep系列 3. 其他相关产品 由于低血清培养基在成分配比上与基础培养基有所不同,其培养液的pH、渗透压及碳酸氢钠添加量等有所改变,以及细胞生长速度、分种比例、收毒时间及次数等都与用户以往的经验和习惯不同,在使用低血清培养基时,容易给用户造成一定的困难。因此,要使用好低血清培养基,用户必须打破以往形成的使用习惯,以一种全新的姿态来认识低血清培养基。我们可以提供以上产品的试用装,用于您工艺优化小试,如果您对以上产品感兴趣,欢迎联系KERRY细胞营养产品中国代理——西美杰。 除以上产品以外,西美杰还是其他全球生物炸弹药原辅料与服务商的中国总代理或一级代理,目前我们提供的原辅料已经被国内数百家生物制药企业,包括国内知名的人用、兽用疫苗企业广泛使用。除降血清方案的细胞营养添加物以外,还涉及上游细胞培养原料,宿主残留检测产品与验证服务,过程污染物检测产品、高纯低内毒素海藻糖、蔗糖等辅料等一站式系列产品和服务。如您对以上任何产品感兴趣,欢迎致电400-050-4006联系我们,在北京,上海,成都,重庆,武汉,广州,深圳等各地都有我们公司当地市场销售人员为您服务。 更多>

          海藻糖新型生物分子保护剂

          海藻糖简介 海藻糖(Trehalose)也被称作α-D-吡喃葡萄糖基α-D-吡喃葡萄糖苷,由于两个吡喃葡萄糖环的连接发生在糖基的还原末端(α-carbons),不会轻易地被酸水解,并且糖苷键不会被α-糖苷酶分解,所以海藻糖是具有很强的稳定性非还原性双糖。海藻糖的研究已经有近百年的历史,自发现以来,不断从对外界恶劣环境表现出非凡抗逆耐受力的物种中发现海藻糖的存在,从而发现了海藻糖对生物体具有神奇的保护作用,是因为海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,而后更多的研究将海藻糖应用到了食品、化妆品、药品、生物制品的工艺中。 海藻糖在生物制品中的应用 在生物制品的冻干保护剂的制剂过程中,糖类是重要的一类辅料,比如蔗糖、甘露醇、甘露糖、山梨醇、麦芽糖等,其中蔗糖是在生物制品中使用广泛,但由于国际药用辅料协会对生物制品的质量、安全性日趋提高的要求,寻找更好的生物大分子保护稳定剂,提高生物制品的稳定性和质量是各大生物制药公司不断追寻的目标。迄今为止,在国际上,海藻糖已经陆续被使用到各类生物制品的冻干保护中,比如国际重磅生物炸弹药,比如Herceptin®,Adcetris®,Avastin®,Lucentis®,Advate®,Gazyva®,Blincyto®,当中就使用了海藻糖作为核心的冻干保护剂,另外,也在越来越多的人用疫苗中,比如MenAfrivac,DengVaxia,HepB (ShanVac),Influenzae (DPIV),MMR等开始使用海藻糖替换血清白蛋白作为保护剂,可以常温条件下干燥存放,不仅可以避免疫苗因为非冷链运输导致的失效问题,而且还能防止因为血源污染导致的乙肝、艾滋病等致命疾病的传播。 海藻糖相比蔗糖具有更加优质保护作用的原因 表1. 海藻糖和蔗糖物理性质比较 性质 海藻糖 蔗糖 Solubility (g/100 g H20, at 20°C) 40.6-68.9« 200 Melting temperature (°C) 210-215 188 Glass transition temperature (Tg, °C) 110-120 65-75 Relative viscosity 1.85 1.3 # Equatorial -OH 8 46 Diffusion coefficient (cm2/s) 1.91 x 10-8 5.89 x 10-8 Density (g/cm3, at 25°C and 85°C) 1.58,1.41 1.59,1.37 Hydration number 11 8 Rate of hydrolysis (s_1, at 25°C) 3.3 x l〇-15 5.0 x l〇-n Stability in extreme pH (% remaining) >99% ^0% at pH 3-4 Acrylamide formation 0 mg/mol Asn 98 mg/mol Asn Calcium dissolution in phosphate buffer 24 ppm 6 ppm Sweetness 45% 100% 1. 高玻璃态转变温度(Tg) 在不同的干燥或失水过程中,包括冷冻干燥和喷雾干燥,海藻糖可轻易地干燥为非晶体材料,并具有高玻璃态转变温度(Tg>100°C)[12,3]。不同文献中报道的Tg有所不同,导致不同结果的原因是由于不同的检测条件,其中最重要的因素是残余水分含量。Crowe等人所报道的在残余水分含量为0.3%时,Tg为111.3°C[4]。随着水分的增加,Tg降低,这是水的增塑作用导致的。尽管如此,在含水量相似的情况下,海藻糖的Tg值高于蔗糖(图1)。 图1. 海藻糖和蔗糖玻璃态转变温度(Tg)与含水量(wt%)的相关性[4,5]。 2. 水解稳定性 水解速率对活性生物制品的稳定有着深远的影响,因为还原性单糖,如葡萄糖,易于发生美拉德反应(或褐变反应)。海藻糖对于水解的稳定性是因为海藻糖中的糖苷键具有较低的能量(<1 kcal/mol)[5,6],而蔗糖中糖苷键的自由能更高(27 kcal/mol),二水化合物晶体的水解温度高达97°C[7,8],而且在弱酸存在的情况下,蔗糖更易于水解产生葡萄糖和果糖,而海藻糖在ph3.0的情况下仍然非常稳定。在另一项研究中,在没有酸催化的条件下,海藻糖的水解速率也明显低于蔗糖:在25°C时,分别为3.3 ×10?15 s?1和5 × 10?11 s?1[9]。这两种糖类水解速率和温度的相关性如图2所示,而且研究表明这些速率不随pH和离子强度的变化有显著改变。此外,有文献报道蔗糖在冷冻过程中可发生水解,然而海藻糖并没有类似的报告[10-12]。 图2. 海藻糖和蔗糖水解速率比较。0.1 M PBS(pH8.1),温度范围100°C -240°C[9]。 3. 低吸湿性 与此同时,在一些应用中,如片剂制剂,相对于其他糖类,结晶态海藻糖还有一个优势,即他低吸湿性,从而促进药片粘性的降低和稳定性的提高。在海藻糖和蔗糖不同物理性质的比较中,这些性质的不同大约是由于它们构象柔性不同所导致的。大多数二糖,构象受单糖残基间的分子内氢键影响。结晶态下的海藻糖,不存在直接的分子内氢键[13],而在蔗糖内就存在这样的氢键[14]。尽管如此,海藻糖内还是存在间接的通过水分子表现的分子间氢键[13-15],平均键长相对较短(1.825 Å)。因此,相对作用较强[16]。对于海藻糖和蔗糖,环氧原子的角度分别是114.1°和116.1°,而糖苷氧原子的角度分别是115.8°和114.4°[13-17]。这两种糖类的其他结晶学数据可在这些文献中找到[13,16-18]。 图3. 不同糖类晶体状态下吸水性。25°C,相对湿度90%[19]。 4. 高水合性 海藻糖还有一个明显的特点就是具有较高数量的Equatorial –OH基团,这使海藻糖在水溶液中有更强的相互作用,并更容易把它自己包含在水分子簇中。相反的,蔗糖不能很好的把自己整合在水分子簇中,从而造成了更大的结构[20]。事实上,相对于海藻糖,蔗糖更不容易与水结合。(图4)这一特点的实际意义说明,对于基于蔗糖的配方,在低含水量(如<1%)时,含海藻糖配方更不容易水解。 除以上原因外,两种糖类的性质的不同也可能是由于分子间氢键数量的不同导致的(尤其是在高浓度下)。海藻糖只形成一个这样的键,而蔗糖会形成两个,因此,对于海藻糖会有更多空闲的位点与水分子的氢键结合,从而导致了更高的水合数量[21,22]。随着海藻糖浓度(5-90wt%)的增加,水合数量递减(大约从13到3)。图4中的这种减少是由于牺牲糖分子附近的水分子造成的,迫使它们通过增加分子内氢键的方式减少对氢键的需求。这种方式形成了一种折叠的构象,进而减少水合数量[21-24]。红外线光谱和激光拉曼光谱等技术用来验证蔗糖分子糖苷键周围的折叠情况,然而这种构象的改变在海藻糖中没有发现[26]。 图4. 海藻糖和蔗糖水合数量与糖类浓度(wt%)相关性[21] 5. 更低的水扩散系数和更高的粘性 海藻糖和蔗糖的物理性质比较说明了,虽然密度相似,海藻糖具有更低的水扩散系数和更高的粘性[21]。所有性质之间都是紧密联系的。随着密度增加,自由体积减少,所以扩散性降低,粘性增加[26]。蔗糖的扩散系数要高于海藻糖,尤其是在高浓度的情况下:74wt%糖浓度,蔗糖和海藻糖的扩散系数分别是5.89 × 10?8和1.91 × 10?8 cm2/s。更快的扩散系数是由于蔗糖具有更小的水合数造成的。因为水合的蔗糖在尺寸上更小,所以它更易扩散。然而,在低浓度时,系统中水分子相对显著增多,涉及其中的糖类并不敏感,所以没有发现扩散性的不同。随着系统中糖类流动性限制的增加,粘性预计会增加。事实上,Sola-Penna和Meyer-Fernandes[27]的研究表明海藻糖粘性高于蔗糖,并且在更高的浓度下,差距增加。图5中这说明在具有高浓度蛋白的应用中,含海藻糖的配方具有更高的整体粘性。 图5. 浓度范围在0-1 M,海藻糖和蔗糖相对粘性[25]。 另外,在细胞冻存,细胞培养等方面,海藻糖也有相对一般糖类同样具有非常明显的优势,如果您对这方面内容感兴趣,欢迎关注西美杰公众号(xmjsci)后期推送内容,或者致电西美杰客服热线400-050-4006进行咨询。Pfanstiehl高纯低内毒素注射级海藻糖 美国Pfanstiehl Inc.专注研发与生产注射级高纯度低内毒素海藻糖,并且符合USP,EP,JP,ChP等多国药典。产品在FDA备案,DMF为激活状态,在FDA批准的含海藻糖产品中,100%的海藻糖都来自于Pfanstiehl。作为Pfanstiehl在中国区代理商——北京西美杰科技有限公司,将Pfanstiehl高品质的糖类产品带给广大客户解决生物制品冻干保护作用难题的同时,也一直致力于为客户提供高品质的售前售后服务,关注和陪伴国内生物制药企业一起成长,我们现阶段正在积极响应CFDA的辅料关联审评工作,配合使用我们产品的企业尽早通过审评。如需进行产品咨询,请直接联系Pfanstiehl中国代理-北京西美杰科技有限公司(热线电话400-050-4006)。 更多>

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          糖类辅料应用多多,你都知道吗?

          药用辅料一般是指在生物制剂配方中包含的非活性成分,虽然是非活性成分,但药用辅料往往具备赋形,成型,增溶,助溶等作用,甚至会影响药效,药品质量和安全性等方面。所以,药用辅料在整个制药过程一直受到各制药企业的重视。药用辅料同时需要达到较高的标准才可在生产中使用,如高纯度,低内毒素,符合多国药典标准,以及ICH(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use)特定标准等。 糖类辅料是药用辅料中被广泛使用的一类辅料,如海藻糖,蔗糖,半乳糖,甘露醇,甘露糖,麦芽糖,山梨醇等。蔗糖由于独特的性质,一直被用于蛋白的稳定剂及细胞培养过程当中。近年来,研究人员对海藻糖的研究逐渐增多,由于海藻糖的大规模生产和纯化技术的发展以及海藻糖在热稳定性等方面都优于蔗糖,海藻糖成为各制药企业最常用到的用于稳定蛋白的糖类辅料。对于糖类辅料在最终制剂配方中的使用大家已经熟知,而近几年对糖类辅料研究的不断深入,发现这些常规的辅料在制药的其他阶段,如细胞培养,纯化等阶段,都有不同的应用。本篇文章主要就是汇总一些近些年关于糖类辅料在生物制药过程中的新应用,希望可以给制药公司研发人员提供一些新思路。 1.海藻糖在细胞保存中的应用 细胞的低温保存是生物制药过程中重要的一个环节,细胞保存的好坏影响着复苏后细胞的活性和状态,最终将影响蛋白的产量。DMSO(二甲基亚砜)是科研及工业中常用的细胞冻存时使用的防冻剂,可以有效的防止冷冻过程中细胞内形成冰晶。但DMSO问题就是其具备较高的毒性,这不仅会对细胞造成一定影响,严重威胁着使用者的身体健康。好消息是,研究表明由于海藻糖的特殊性质,海藻糖也可用于细胞冻存,而且效果不比使用DMSO差。一些大型先进的制药企业,已经在内部尝试使用海藻糖代替DMSO进行细胞冻存。实验数据证明,逐渐降低DMSO用量,增加海藻糖用量对细胞进行冻存处理,在复苏后,细胞状态和活性与完全使用DMSO进行冻存无任何差异。这些企业现在也正在积极尝试摸索完全使用海藻糖代替DMSO进行冻存的条件,相信这项技术会使使用者不再被DMSO这种毒性试剂所困扰。 2.海藻糖在细胞培养中的应用 在治疗性抗体的生产过程中,经常困扰着众多企业的就是这些抗体的聚集现象。抗体蛋白的聚集可导致蛋白大小,可逆性,溶解度,结合能力,构象的改变,这些结构上的变化直接导致蛋白滴度及免疫性的降低。而且,这些结构变化还会导致新的抗原表位出现,导致了不在预期之内的免疫反应的发生。最近一项研究表明,实验人员在CHO细胞培养过程中分别使用含海藻糖和不含海藻糖培养基去培养细胞,随着培养时间的推移,在某一时间点,无海藻糖培养基中的活细胞密度急剧下降至接近0,而含海藻糖培养基中的活细胞密度始终保持稳定。另一方面,含海藻糖培养基表达蛋白的浓度也是一直高于不含海藻糖培养基中的表达。同时,对这两个不同培养基中表达蛋白mRNA进行Real-time PCR的结果也是如此。这种现象是因为海藻糖在细胞生长过程中充当一种具抗聚集作用的化学分子伴侣,同时海藻糖在这个过程中还可以稳定细胞膜和蛋白,使细胞活性提高,进而增加目的蛋白产量。因此,该研究为提高治疗性抗体产品质量提供了一个切实可行的方案。 3.海藻糖在纯化过程中的应用 海藻糖这种抗聚集的作用不仅可以应用于细胞培养阶段,同时还可应用于纯化阶段。纯化柱的制备是影响蛋白纯化的核心,好的纯化柱对可以保证最大程度去除杂质,这样可以保证最终药物蛋白的药效和安全性。然而,纯化柱不是可以一直使用的,由于损耗,需要随时更换新的纯化柱。而海藻糖使得蛋白聚集现象大幅降低,这样无形中延长了纯化柱的使用寿命,使时间和成本大幅降低。大致估算海藻糖的应用可以使纯化柱寿命延长三分之一左右。 4.半乳糖在细胞培养中的应用 葡萄糖和谷氨酰胺一直作为细胞培养基中的主要碳源和能量来源,但由于培养基中葡萄糖和谷氨酰胺代谢速度过快,并且这个过程中大量积累乳酸和铵,抑制细胞功能,使得培养效率变得非常低。为了克服这一阻碍,研究人员尝试使用半乳糖和谷氨酸盐替换以上两种成分。结果表明更换为半乳糖和谷氨酸盐后,乳酸和铵的积累明显降低,并且极大延长了培养基培养时间,这种方法为细胞培养提供了一个更有效的方案。在实际应用中,许多企业已经在使用半乳糖来替换葡萄糖了。Pfanstiehl Inc.于1919年在美国伊利诺伊州成立,一百多年的研发生产经验使其成为专业化生产高品质药用糖类辅料的企业。Pfanstiehl代表产品有海藻糖,蔗糖,半乳糖等,产品具备高纯度,低内毒素,注射级药用辅料,符合包括中国药典在内的多国药典标准以及ICH Q3D金属元素标准。同时,为了配合CFDA关于药包材药用辅料与药品关联审评政策,Pfanstiehl积极配合制药企业进行关联审评,现阶段Pfanstiehl海藻糖和蔗糖均提交了关联审评材料,并且获得海藻糖关联审评受理号。 北京西美杰科技有限公司作为Pfanstiehl中国代理商已经成为中国地区众多生物制药与疫苗企业的供应商,同时,西美杰会继续为中国客户提供更多的产品与服务,让企业在原辅料筛选,产品生产与质检,申报等工作中节省人力,资金,时间。 更多>

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          北京西美杰科技有限公司(Beijing XMJ Scientific Co.,Ltd,以下简称西美杰)于2006年成立,由留美归国生物领域专业人士创办。西美杰坚持自己的经营理念,勤奋踏实地整合全球产品资源与技术资源,为高校、科研院所的科研工作者以及生物制品生产企业提供一站式产品服务方案,帮助科研及企业单位缩短科研时间... 更多>

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